细胞自噬(autophagy)是真核生物中进化保守的对细胞内物质进行周转的重要过程。该过程中一些损坏的蛋白或细胞器被双层膜结构的自噬小泡包裹后,送入溶酶体(动物)或液泡(酵母和植物)中进行降解并得以循环利用。
检测自噬形成时,使用电镜耗时长,不利于监测(Monitoring)自噬形成,而 hLC3 在自噬形成过程中会发生聚集的现象,因此吉满生物利用 hLC3 这种现象,构建了带 GFP 和 RFP标记的用于细胞自噬检测的慢病毒和腺病毒产品。无自噬时,RFP-GFP-hLC3 融合蛋白弥散在胞浆中,在荧光显微镜下显示为黄色斑点;自噬形成时,由于自噬小体进入第二阶段后,与溶酶体进行融合,形成自噬溶酶体。自噬溶酶体由于溶酶体内部的酸性环境,可以导致 PH下降,GFP 淬灭,因此,GFP 的减弱可指示自噬溶酶体形成的顺利程度,GFP 越少,则从自噬小体到自噬溶酶体阶段流通得越顺畅。反之,自噬小体和溶酶体融合被抑制,自噬溶酶体进程受阻。RFP 是一直稳定表达的,因此通过不同颜色斑点的计数可以清晰看出自噬流的强弱。