报告基因检测是现代分子生物学研究领域中分析结构基因旁侧区域潜在的顺式元件(如启动子、增强子和沉默子等)和反式作用因子相互作用关系的一种重要工具。吉满生物生产的双荧光素酶报告基因检测试剂盒(Dual Luciferase Reporter Gene Aassy Kit),是一种结合萤火虫和海肾荧光素酶检测的先进辅助报告基因技术。
虽然萤火虫和海肾荧光素酶都具有生物发光报告基因的检测特点,但它们却具有完全不同的进化起源,因而它们的酶结构和底物要求完全不同。我们利用这一特点,将它们配合起来使用,即可形成十分有效的双荧光素酶报告基因系统,其中Renilla Luciferase通常作为内对照。
它的实验原理是先以萤火虫荧光素(firefly luciferin,以下简称荧光素)为底物来检测细胞中的萤火虫荧光素酶(firefly luciferase,以下简称荧光素酶)。荧光素酶在ATP,Mg2+和O2参与下催化荧光素,生成氧化荧光素(oxyluciferin),荧光素在被氧化过程中,产生生物发光(Bioluminescence)。然后在后续实验中抑制该反应,来终止萤火虫荧光素的生物发光,同时加入海肾荧光素酶(Renilla Luciferase)的底物腔肠素(coelenterazine)。在O2参与下,腔肠素被海肾荧光素酶催化氧化成氧化荧光素(coelenteramide)产生生物发光。然后通过化学发光仪或液闪测定仪测定生物发光。
双萤光素酶报告基因检测系统在单萤光素酶报告基因的基础上引入了“内参对照”报告基因,这样可以在最大程度上减小细胞数目、细胞生长状态和转染效率等外在因素对于实验的影响,使得实验结果更为可信。